外泌体：被低估的细胞通讯媒介

外泌体(exosome)是由细胞多囊泡(MVB)与细胞膜融合后，释放到细胞外基质中的膜性囊泡，直径约为40-100nm。其天然存在于体液中，包括血液、唾液、尿液和母乳，被分泌出的外泌体会进入血液、唾液、尿液、及乳汁等体液中，通过循环系统到达其他细胞与组织，产生远程调控作用。外泌体携带有多种蛋白质、脂类、DNA和RNA等重要信息，不仅在细胞与细胞间的物质和信息传递中起重要作用，更有望成为多种疾病的早期诊断标志物。外泌体介绍 外泌体提取的基本步骤包括细胞培养培养基更换、收集培养上清、超离心提取、洗涤。以下是具体步骤：1、细胞培养:选择适合的细胞系，培养至对数生长期，确保细胞状态良好2、培养基更换:在细胞培养后期，将培养基更换为无外源性血清的培养基。这有助于降低背景噪音，提高外泌体的纯度。3、收集培养上清:收集培养液，转移到离心管中，离心去除细胞和细胞碎片(一般在300-400g，10分钟)。4.超离心提取:将上清液转移到新的离心管，进行超离心(100.000g，70分钟)。这一过程可以有效分离外泌改5.洗涤:重悬沉淀的外泌体，通常在PBS(磷酸盐缓冲液)中，再次超离心以去除杂质。外泌体提取 1、外泌体作为药物载体：实现靶向给药。外泌体具有负载“货物“并将其传递给靶细胞的能力,可用于细胞间通讯，尤其是远距离通讯。以外泌体作为药物转运载体，具有免疫源性低、运输效率高、稳定性好和靶向性强以及能跨越血脑屏障等独特优势。外泌体也适合递送各种化学物质、蛋白质、核酸等。Buller B等将负载 miR-146的外泌体注射至患有角质细胞瘤小鼠的肿瘤部位，发现miR-NAS有效的抑制了肿瘤的生长。2、疾病诊断的分子标志物：不同疾病的不同类型细胞都能分泌含有不同miRNAS和RNAS的外泌体，使得从病人的体液中分离外泌体作为疾病诊断成为可能，尤其在肿瘤诊断中。除此之外，外泌体还可以应用于非肿瘤疾病的诊断。WelkerMW等研究发现血清外泌体CD81可能是慢性丙型肝炎诊断的潜在蛋白标志物。3、促进组织修复和再生：近年的研究发现，干细胞来源外泌体是干细胞旁分泌活动的一种重要方式，可介导其促进组织再生。Chen等发现，ADSCs-exo的联合治疗可减少大鼠急性缺血性卒中的梗死面积，促进神经功能恢复。ADSCs-ex0可以避免干细胞治疗的免疫排斥、伦理问题等缺点，且具有高稳定性、易于储存、无需增殖、便于定量使用等优势，与单一的细胞因子比较，具有较高的安全性和更大的组织再生潜能。外泌体应用方向