类器官培养之基质胶去除攻略

很多老师后台私信咨询类器官培养时基质胶如何去除，避免基质胶干扰后续的wb、流式以及病理实验，那我也是查看了一些文献推出了自己的攻略，方便各位老师借鉴。 一、EDTA-PBS(温和去胶溶液)(浓度为1-5mM，具体浓度参照胶的浓度调整) 使用方法： - 预冷溶液：使用前将EDTA-PBS置于4℃预冷。 - 解离步骤： 1. 吸除培养基，加入预冷EDTA-PBS（体积覆盖类器官培养物）。 2. 冰上孵育30分钟（或4℃静置），期间轻摇培养皿辅助基质胶溶解。 3. 离心（300 ×g，5分钟）收集类器官，PBS洗涤2-3次。 二、Dispase酶溶液（酶解法解离基质胶）(1-2 U/mL（常用1 U/mL，根据类器官耐受性调整）。) 使用方法： - 解离步骤： 1. 吸除培养基，加入预热的Dispase溶液（37℃）。 2. 37℃孵育10-20分钟（观察基质胶溶解情况，避免过度消化损伤类器官）。 3. 加入等体积含血清的培养基终止反应（血清抑制酶活性）。 4. 离心（200 ×g，5分钟），PBS洗涤2-3次。 三、其他替代试剂 1. Collagenase IV（胶原酶）： - 终浓度1-2 mg/mL，溶解于PBS，37℃消化30-60分钟（适合含胶原的基质胶）。 2. Accutase： - 直接使用商品化Accutase溶液，37℃孵育10-15分钟（温和解离，适合脆弱类器官）。 关键注意事项 1. 无菌操作： - 所有试剂需过滤除菌（EDTA-PBS/Dispase），避免污染。 2. 类器官活性保护： - 控制酶解时间，避免过度消化导致细胞死亡（可通过台盼蓝染色检测活性）。 3. 残留基质胶检测： - 若洗涤后仍有胶状残留，可增加离心速度（500 ×g）或延长洗涤次数。 4. 温度敏感性： - EDTA-PBS需预冷，Dispase需预热至37℃以提高效率。 5. 试剂保存： - Dispase母液分装后-20℃保存，避免反复冻融（活性损失